
锹形虫
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2022/10/11阅读:33主题:嫩青
【说明书】赛默飞Lipo2000与Roche Fugene的实现
赛默飞Lipo2000与Roche Fugene
“基础实验往往会“祖传”一份Protocol大合集(幸运的话),但不同实验室之间往往不敢参考,就像甲医院的报告无法在乙医院被解释一样。所以,如果能够从基本的技术文档出发解决实验核心步骤,并能够根据技术文档和产品的更新自行调整和更新实验内容甚至实验步骤,这即是“良好通用性”的参考资料。而这,都可以从一份份夹在产品内的说明书(handbook)说起...
1. 产品简介
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赛默飞(thermofisher)转染试剂Lipofectamine2000
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Roche(罗氏)x-tremeGENE HP DNA TRANSFECTION REAGENT
2. 简明使用
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赛默飞(thermofisher)转染试剂Lipofectamine2000
常规接触到转染时,我们用Lipofectamine2000(以下简称Lipo)配制转染混合液,但其具体的配置依据往往不清楚。对于ssDNA、ssRNA和dsDNA与转染试剂的量的关系,需要经历怎样的计算获得?此处以转染si-RNA(小干扰双链RNA)举例配制其转染混合液; 赛默飞提示常规20bp左右的双链RNA,其分子量约为6569g/mol,计算获得152.23pmol的ssRNA质量为1ug,如图1
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不难得到,当我们配制ssRNA稀释液浓度为20pmol/ul
时,若加入稀释液的量为a ul,因为Lipo与ssRNA的量是线性增长关系,则最终需要加入Lipo的量为(20a/100)x5=a,达到了1:1加样试剂的效果,简化实验加样量的计算
。
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Roche(罗氏)x-tremeGENE HP DNA TRANSFECTION REAGENT
该试剂常用DNA的转染,而其转染方案和加样在技术文档中已经写的很简明,并没有想ssRNA一般的换算过程,对于DNA,赛默飞提示使用的量刚就是ug,因此如图3
所示根据所使用试剂的稀释情况计算加样量即可。简单来说,对于满足转染要求的六孔板每孔加样DNA 2ug,加样转染试剂2ul-8ul是合适的,即1:1~1:4范围内加样。同样的,该转染试剂的浓度也是1mg/ml,详情见图3
及相关技术文档;

3. 参考材料
由于参考资料较多,所以专门列出,此条后续文章中不再出现
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