【说明书】赛默飞Lipo2000与Roche Fugene的实现

赛默飞Lipo2000与Roche Fugene

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基础实验往往会“祖传”一份Protocol大合集（幸运的话），但不同实验室之间往往不敢参考，就像甲医院的报告无法在乙医院被解释一样。所以，如果能够从基本的技术文档出发解决实验核心步骤，并能够根据技术文档和产品的更新自行调整和更新实验内容甚至实验步骤，这即是“良好通用性”的参考资料。而这，都可以从一份份夹在产品内的说明书（handbook）说起...

1. 产品简介

1. 赛默飞（thermofisher）转染试剂Lipofectamine2000

>产品链接；>技术文档

2. Roche（罗氏）x-tremeGENE HP DNA TRANSFECTION REAGENT

>产品链接；>技术文档；

2. 简明使用

1. 赛默飞（thermofisher）转染试剂Lipofectamine2000

常规接触到转染时，我们用Lipofectamine2000（以下简称Lipo）配制转染混合液，但其具体的配置依据往往不清楚。对于ssDNA、ssRNA和dsDNA与转染试剂的量的关系，需要经历怎样的计算获得？此处以转染si-RNA（小干扰双链RNA）举例配制其转染混合液； 赛默飞提示常规20bp左右的双链RNA，其分子量约为6569g/mol，计算获得152.23pmol的ssRNA质量为1ug，如图1；

图1 Lipo技术文档提示对于细胞生长汇合度满足转染要求的六孔板，其每转染100pmol ssRNA建议使用5ul Lipo （Lipo商品浓度为1mg/ml），如`图2`；

图2 另如果我们购买的ssRNA为干粉，则在使用之前需要稀释至合适的浓度。而由`图2`有转染ssRNA的量和使用的Lipo量是呈线性关系的，当我们使用6孔板进行转染时，我们不妨将ssRNA稀释液的浓度调整至20pmol/ul （若您的商品ssRNA浓度为nmol/tube，超纯水稀释），此时不难得到当我们加入7.5ul ssRNA稀释液的时候，我们只需要再加入7.5ul的Lipo即可满足上述技术文档的建议（每100pmol的ssRNA转染需要5ul的Lipo），具体计算如下：

不难得到，当我们配制ssRNA稀释液浓度为20pmol/ul时，若加入稀释液的量为a ul，因为Lipo与ssRNA的量是线性增长关系，则最终需要加入Lipo的量为(20a/100)x5=a,达到了1:1加样试剂的效果，简化实验加样量的计算。

2. Roche（罗氏）x-tremeGENE HP DNA TRANSFECTION REAGENT

该试剂常用DNA的转染，而其转染方案和加样在技术文档中已经写的很简明，并没有想ssRNA一般的换算过程，对于DNA，赛默飞提示使用的量刚就是ug，因此如图3所示根据所使用试剂的稀释情况计算加样量即可。简单来说，对于满足转染要求的六孔板每孔加样DNA 2ug，加样转染试剂2ul-8ul是合适的，即1:1～1:4范围内加样。同样的，该转染试剂的浓度也是1mg/ml，详情见图3及相关技术文档；

图3 全文完，感谢浏览。

3. 参考材料

由于参考资料较多，所以专门列出，此条后续文章中不再出现

1. Stealth/siRNA Transfection Protocol Lipofectamine 2000
2. DNA and RNA Molecular Weights and Conversions
3. X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent-Merck_KGaA
4. X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent Handbook-2020
5. Lipofectamine 2000 Handbook